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      Chinese Name

      中文名


      D-熒光素

      English Name

      英文名


      D-Luciferin

      Alias

      別名


      (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazoly)-2-thiazoline-4-carboxylic acid;Firefly Luciferin


      CAS NO.


      2591-17-5

      Formula

      分子式


      C11H8N203S2

      M.W.

      分子量


      280.32

      Class

      分類


      生化試劑


      活體成像技術(optical in vivo imaging)目前主要采用生物發光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術,生物發光法是基于熒光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化學發光的原理,將體外能穩定表達熒光素酶的細胞株植入動物體內,與后期注射入體內的底物發生反應利用光學系統檢測光強度,間接反映出細胞數量的變化或細胞的定位。這項技術已被廣泛應用于多個領域,最常用的有腫瘤或疾病動物模型的建立,并可用于病毒學研究、siRNA研究、干細胞研究、蛋白質相互作用研究等。

      原理:常見的熒光素酶有兩種,分別是螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase,編碼基因是luc)和海腎熒光素酶(Renilla luciferase,編碼基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,底物被氧化發光(不同底物光的顏色和波長不同),當底物過量時,產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性。
      應用:
      1)體外化學發光分析(in vitro);
      2)活體成像實驗(in vivo); 
      3)高靈敏度ATP分析;
      4)活細胞、組織或生物體內luc標記基因和熒光素酶-融合基因體內/體外表達的成像分析;
      5)廣泛用于報告基因分析,免疫分析和ATP熒光衛生監測分析;
      步驟:
      Protocol 1In Vitro Bioluminescent Assays / 體外生物發光檢測
      1)用33.3 mL蒸餾水溶解1.0 g D-熒光素,配制成100 mM的儲存液(200×,濃度30mg/ml)?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。
      2)用組織培養基1∶200稀釋儲存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)。
      3)去除培養細胞的培養基。 
      4)待圖像分析前,向細胞內添加1×熒光素工作液,然后進行圖像分析。
      Protocol 2:In vivo analysis / 活體成像分析
      1)用無菌的PBS(w/o Mg2+、Ca2+)配制D-熒光素工作液(15mg/mL),0.2 um濾膜過濾除菌。一旦使用,保持冰冷且避光。
      2)注射量取決于注射方式,具體如下:
      注射方式劑量靜脈注射(25-27 gauge針頭)按10 uL/g體重濃度,加入相應體積的15 mg/mL熒光素工作液 腹腔注射(25-27 gauge針頭)按10 uL/g體重濃度,加入相應體積的15 mg/mL熒光素工作液肌肉注射(27 gauge針頭)50 uL,濃度為1–2 mg/mL熒光素工作液鼻內注射(pipette)50 uL,濃度為3 mg/mL熒光素工作液3)注射入體內5-10分鐘后,進行成像分析。
      溶解:0.25%濃度溶解于甲醇,形成近乎無色至淺黃色的清夜
      保存:-15°C 避光











      1. Barth et al. Molecular Therapy. 2008, 16. 957-964.
      2. Mahller et al. Cancer Research. 2008, 68 (4). 1170-1179.
      3. Marques et al. Journal of Neurovirology. 2008, 14 (3). 229-238.
      4. Stish et al. J. Neurooncol. 2008, 61 (1). 51-61.
      5. Zhang et al. Cancer Research. 2007, 67. 9389-9397. 6. Baia, G. et al, Brain Pathology, 2007, 18 (2), 172-179.
      7. Barth, A. et al, Molecular Therapy, 2008, 16 (5), 957-964.
      8. Su Y. et al. Clinical and Experimental Metastasis, 2009

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